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液体菌种生产注意事项
发布者: 发布时间:2014/5/6 阅读:1449

1 液体菌种的特点
  传统菌种生产工艺,一般是由试管母种扩繁成二级种、三级种,生产周期长、污染率高、成本高、需要大量人工、管理困难。食用菌的液体发酵技术起源于美国,据资料报道,1947年,美国的 H.Humfeld对蘑菇(Agaricus compestris)进行深层发酵并得到了菌丝体,从此食用菌的发酵生产在世界范围内兴起。液体菌种由于具有生产规模化、控制自动化、生长无菌化、发菌高速化的生产应用优势,为食用菌产业化的发展提供了良好的种源条件,是食用菌产业化发展的必然方向,已被业内人士所看好。现在能用液体菌种的食用菌有香菇(Lentinus edodes)、草菇(Volvariella volvacea)、金针菇(Flammulina velutipes)、平菇(Pleurotus ostreatus)、蘑菇(Agaricus compestris)、猴头菇(Hericium crinaceus)、灵芝(Ganoderma lucidum)、毛木耳(Auricularia polytricha)、滑菇(Pholiota nameko)、黑木耳(Auricularia auricula)等。

  液体菌种与固体菌种相比有以下优点。

  1.1 菌种制作程序简单 液体菌种的制作,只要同一种培养基,培养出来的菌种,可作为母种使用,也可作为原种、栽培种使用,减少了培养基的更换和培养环境的改变。

  1.2 生产周期短 固体菌种从母种到栽培种三级制种的时间为2个月,而液体菌种只需20d,培养固体原种或栽培种的时间需25-40d,而培养一批液体菌种只需3-7d。液体菌种大大地缩短了制种时间。

  1.3 菌丝球菌龄一致,生长旺盛,生活力强,定植快 接种后,萌发点多、发菌快、出菇周期短。

  1.4 接种方便、成本低,适宜工厂化生产 液体菌种可以用注射等多种形式接种,简便、快速、均匀、适合于机械化、自动化大规模生产使用。用液体菌种接种一般每袋成本是1-3分,每人每小时可接800袋以上,提高效益4-5倍。

  2 液体菌种的生产流程

  液体菌种的深层发酵培养,需有种子罐、发酵灌、空气过滤器、空气压缩机等专用设备,对无菌操作有更严格要求,适合于专业科研机构和大型食用菌生产工厂。

  工艺流程:培养基配制—→分装—→消毒—→冷却—→接种—→发酵培养—→液体菌种

  配料时先将主料(碳源、氮源)混合后用不锈钢锅煮熟并取汁,再将辅料KH2PO4、MgSO4等溶入,混匀后装入罐中加热,至121℃并维持 40分钟左右灭菌,灭菌结束后用冷水冷却至培养温度,然后接种进行培养,培养时根据不同的菌种,设定适宜的培养条件。培养期间应注意观察,并做好记录。包括温度、压力、气流量、排出气体的气味等。培养过程中,可随时无菌操作采样分析,几天后待菌球密度合适(从视镜观察)即可使用。

  3 液体菌种的培养基介绍

  液体菌种的培养基主要成分是碳源、氮源、矿质元素和维生素。碳源主要是蔗糖、葡萄糖等。氮源主要是蛋白胨、酵母粉等。无机盐可加入磷酸二氢钾、硫酸镁等。维生素可加入维生素B。液体培养基的液体粘度与食用菌的菌球形成关系密切。粘度小,形成的菌丝球大,数量小;粘度大,形成的菌丝球小,数量大。在生产中常加入琼脂和玉米粉增加粘度。培养基配方大致为:麸皮3%,玉米粉3%,葡萄糖2%,磷酸二氢钾0.3%,硫酸镁 0.15%,维生素B110mg/L。以下介绍八种常用食用菌的配方:
  a.葡萄糖2%,玉米粉2%,磷酸二氢钾0.3%,硫酸镁0.15%,蛋白胨0.2%,维生素B110mg/L。适合大多数品种。
  b.玉米粉3%,葡萄糖1%,磷酸二氢钾0.3%,硫酸镁0.15%,蛋白胨0.2%,维生素B110mg/L。适合培养平菇。
  c.土豆20%,葡萄糖2%,硫酸铵0.1%,磷酸二氢钾0.3%,硫酸镁0.15%,维生素B110mg/L。适合香菇。
  d.玉米粉4%,葡萄糖1%,磷酸二氢钾0.3%,硫酸镁0.15%,蛋白胨0.2%,维生素B110mg/L。适合培养金针菇和猴头。
  e.麦麸5%,葡萄糖2%,玉米粉2%,磷酸二氢钾0.3%,硫酸镁0.15%,蛋白胨0.2%,维生素B110mg/L。适合培养黑木耳。
  f.玉米粉50g,麦芽汁100ml,琼脂0.5g,水850ml。适合培养草菇、蘑菇。

  4 液体菌种接种时怎样防染菌

  用液体菌种生产栽培袋,同固体菌种相比,除降低成本、缩短周期、提高产量外,而且降低污染率4%(固体菌种污染率在5%左右,而液体菌种污染率不足1%)左右,但若不注意相关环节,也会造成接种后菌袋污染,主要原因有以下几个方面:

  4.1 培养基灭菌不彻底 在菌袋灭菌过程中因温度或时间处理不当,造成灭菌不够彻底,液体菌种接入后,菌丝长至1/3左右时,杂菌由料中间向外生长造成污染。

  4.2 接种环境不达标 接种环境过于粗放、接种室处理程度不够等原因导致接种环境相对较差,接种过程中杂菌及其它孢子落入菌袋中的数量太多,形成优势而导致染菌。

  4.3 接种不熟练 使用液体菌种初期,扎袋(口)、封袋(口)技术不熟练,使培养基在空气中暴露时间过长,或接种枪频频接触菌袋、菌筐的外表面而导致染菌。

  4.4 液体菌种中营养残留过多 液体菌种正常培养,当达到培养终点时残糖浓度一般在0.5%以下,若因配制培养基时浓度太大,或其它原因导致残余营养物质浓度过高,杂菌极易在这样的营养液体上萌发、繁殖,因而易导致染菌。

  4.5 菌种老化 液体菌种老化甚至自溶以后再接种,萌发能力大大降低或不萌发,而局部湿度又大,因而易造成染菌。

  5 液体菌种的质量检查

  在液体菌种的生产过程中,对培养情况及时做出判断,尽早安排生产显得相当重要。培养结束时,必须经过检查液体菌种的质量才能使用。

  检查发酵液质量项目包括:
  ①、纯度检查 镜检或平板培养无细菌、霉菌析出。
  ②、活力检查 镜检菌球边缘菌丝分支细密,用结晶液染色时着色深,菌丝细胞原生质尚未出现凝集现象和空胞,液静止5分钟,醪泥不下沉。
  ③、菌球大小 80%菌球直径小于1mm。
  ④、出菇能力香菇、平菇等菌丝镜检有锁状联合结构,醪液静止培养有原基形成。

  在液体菌种生产过程中,我们总结了一套简便、直观的检测方法:
  a、菌液颜色 如培养液颜色混浊,大多为细菌、放线菌、酵母菌污染,不能作为菌种使用。菌液中加入糖等营养物质,灭菌后溶液呈浅茶红色,随着营养的被利用,溶液颜色也越来越淡,绝大多数呈淡黄色或橙黄色,如平菇、金针菇。也有些品种比较特殊,如香菇、猴头的培养液呈黄棕色。黑木耳的培养液呈青褐色,粘稠,有香甜味。蜜环菌呈浅棕色。
  b、菌液气味 菌种培养前期,因菌液中含有大量单、多糖类营养物质,因而糖香味很浓,随着营养的被利用,菌液的糖香味越来越淡,取而代之的是菌丝特有的芳香气味。而染菌的培养液则散发出酸、甜、霉臭、酒精等各种异味。
  c、菌丝体(菌球)浓度状态 一般来说,接菌初期,菌体周边长出白色菌丝;接菌中期,菌丝断落到菌液中而产生新的菌球;接菌后期,菌球达到最大的浓度(一般为80%)。优良菌种取样后静置菌液基本不分层,料液的粘度高,菌丝(球)悬浮力好,菌球大小均匀。老化的菌种菌液颜色会逐渐变深,菌球轮廓不清,甚至自溶成为粥状物。

  6 应用领域

  ①、液体菌种的科研、生产、制种和工厂化的大规模生产单位;②、用于多种微生物的培养;③、含食用菌活性成分的保健食品生产;④、各种奶制品的活性因子生产;⑤、生产菌丝体,提取生物活性成分生产各种食品添加剂;⑥、微生物发酵工程来制取农药、医药、激素等;⑦、科研单位、菌业公司、工业企业和从事食用菌栽培人员的菌类生产。

  7 液体菌种发展及展望

  液体菌种与固体菌种相比具有纯度高、活力强、萌发快、便于集中、快速工业化生产等优势,是食用菌生产的方向和必然。但是由于食用菌液体菌种本身的生物学特性,还存在个别问题:①、不适合所有的菌种,平菇、香菇、黑木耳、灵芝等较易培养的液体菌种可以用于生产。灰树花等类液体菌种,因其生产周期长(大约10天),菌丝较弱,则较难生产。②、有些可以用发酵料、生料栽培的品种,不宜采用液体菌种。③、熟料栽培的品种可以用液体菌种栽培,其效果更好。液体菌种生产在国外已经有很长的历史,在我国过去也曾进行过,由于存在菌种单核化、设备投资过大等问题而没有推广。今后将随着研究的不断深入,这些问题逐步得以解决。食用菌液体菌种发酵技术有着广阔的生产应用前景。

 
 

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